Bingo?先导编辑点突变平台

bet36基因全新研发Bingo?先导编辑基因定点突变平台，可提供精准、高效的在细胞中举行基因点突变。Bingo?平台是基于现在最高效、最清静的先导编辑PE (Prime Editing) 基因定点突变手艺，bet36基因凝聚十多年基因编辑履历，在上千例基因编辑CRO项目履历中总结、优化、提升，乐成率远超古板基因定点突变系统。

先导编辑手艺原理

先导基因编辑 (Prime editing, PE) 是一种更高效、更准确的 CRISPR基因定点突变工具。与古板的CRISPR/Cas9基因编辑手艺差别，先导编辑使用了一种新的Cas9酶——Cas9 nickase (Cas9n)，它不会把DNA完全切断，只会剪切双链DNA中的一条链，这样细胞在修复DNA时，就不会爆发引入随机突变的修复了。

先导基因编辑（PE)就是一个查找-替换的历程。设计一个两头划分携带gRNA 和基因编辑后模板序列的 pegRNA (prime editing guide RNA ,pegRNA)，pegRNA含有特异的引物序列（类似sgRNA）和先导编辑卵白，特异的引物序列可以定位到特异的位点，先导编辑卵白是cas9 nickase（切DNA单链）和逆转录酶（RT）的融合卵白。pegRNA的引物序列指导Cas9 nicknase切割DNA单链，逆转录酶遵照未配对pegRNA序列合成新的DNA序列，原位合成新的编辑后序列替换原有序列的历程。

PE系统的组成包括先导编辑卵白（Cas9 nickase、逆转录酶）和 pegRNA。Cas9 nickase是Cas9 H840A nickase，可以切割DNA单链；逆转录酶（reverse transcripase，RT）是M-MLV；融合后的卵白可以提高基因编辑效率，被称作为PE1。通过引入逆转录酶RT的突变，提高模板链和引物团结位点的团结能力，进而提高没得活力和稳固性，可以讲PE的编辑效率提高2.3-5.1倍，这被称为PE2。

pegRNA一段包括逆转录模板的向导RNA和基因组序列互补的部分作为引物团结位点（Prime binding site, PBS），引物团结位点PBS和目的序列团结的位置作为逆转录的起始位点。

借助Cas9n、逆转录酶和特殊设计的gRNA(prime editing guide RNA ,pegRNA)，先导编辑手艺可以实现4种转换突变（C→T, G→A, A→G, T→C），和8种颠换突变（C→A, C→G, G→C, G→T, A→C, A→T, T→A, T→G），真正实现了准确性和泛用性共存的基因编辑。除了单个碱基的突变外，先导编辑还可以引入多至44bp的插入和多至80bp的敲除。接待联系bet36的手艺专家定制您的专属基因定点突变计划

效劳流程

1. 设计一段带有转录模板（携带想要的基因信息）和须要Prime Binding Site（PBS）的 PE 编辑专用 gRNA——pegRNA。

2. Cas9切口酶在pegRNA上的sgRNA序列指引下，切割DNA单链，pegRNA 3′-端的PBS（引物团结序列）可以与切切断点前的互补序列识别配对

3. 逆转录酶（M-MLV RT）以pegRNA上PBS序列后的人工设计的模板序列为模板举行逆转录，将目的序列直接聚合到切口的DNA链上

4. 编辑后的DNA 双链延伸出一段特殊新合成的 DNA Flap，启动细胞自有的3‘flap-5’flap equilibration 机制，将 DNA 原有的片断切除。

5.不匹配的DNA 双链通过错配修复（mismatch repair，MMR）机制，把非编辑链修复，整个编辑历程就完成了。

相关营业

●  基因定点突变细胞定制：独家专利优化PE系统，可实现阳性率>85%，比古板CRISPR/Cas9点突变换清静，不脱靶，更精准。

●  基因突变细胞系现货：全新推出的点突变癌症模子细胞现货库，笼罩现在最常见的癌症相关基因的定点突变，助力癌症基础研究和癌症诊断、治疗的研发。